台盼蓝染色作为活细胞计数的首选方式，可将细胞膜不完整的死细胞染成蓝黑色，通过在镜下和未被染色的活细胞进行对比并计数，从而可快速了解细胞样品的活率和浓度。但在实际使用过程中，台盼蓝染色计数会出现以下问题：

• 台盼蓝染色的特异性不强，常会将原代细胞的碎片、PBMCs中残留的红细胞计入总数；

• 台盼蓝细胞毒性较大，且染料配制浓度无统一标准，导致在进行多样品计数时由于间隔时间过久而结果误差较大。

台盼蓝染色

而AO/PI染色法可解决这些问题。AO（Acridine Orange）又称为吖啶橙，PI（Propidium Iodide）又称为碘化丙锭，可分别将DNA染成绿色和红色，而碎片和杂质或哺乳动物红细胞由于没有细胞核不会被染色，同时细胞毒性非常小，所以广泛应用于原代细胞计数、细胞治疗、生物制品等领域。

AO/PI双荧光染色

多数情况下，市面上可以见到很多预配制的染液，细胞样本在染液终浓度为2-25μg/mL时，孵育5–30分钟，将可以发出明亮的核染色荧光。但是实际应用时，由于细胞类型、染色条件以及检测仪器的参数不同，实际呈现的效果也不一样。此时，只需按照下文中提供的染色方案即可获得较为稳定的染色结果。

AO/PI快速染色方法：

①预先配置（50μg/mL PI， 10μg/mL AO）的染色预混液；

②吸取 10μL 细胞样本至 EP 管中，加入等体积的 AO/PI 预混染色液，吹打混匀后孵育 5min（终浓度 25μg/mL PI， 5μg/mL AO）；

③轻微吹打后，吸取 10μL 染色后的细胞上样至细胞计数板中进行分析，推荐使用k8凯发自动细胞计数仪C100/C100-Pro，可精准区分AO/PI双荧光染色后的活死细胞，一键计数，精准快速。

k8凯发自动细胞计数仪C100/C100-Pro，除了可用于AO/PI荧光细胞计数，还可广泛适用于细胞计数分析、细胞活力分析、细胞大小分析、检测细胞的转染效率（GFP、RFP）等多重应用场景分析，助你轻松分析细胞数量、活力、大小和荧光强度！

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