冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法。制作过程较石蜡切片快捷、简便，因而多应用于手术中的快速病理诊断。

脑组织冰冻切片的制作步骤

1、固定。大鼠或小鼠灌注取脑，取脑后用多聚甲醛浸泡固定，即能达到冲洗的目的，又不损害组织。

2、脱水。先后用15%，20%，30%的PB蔗糖溶液 进行脑组织梯度脱水，脑组织沉下去就是脱水好了。

3、冰冻切片，推荐k8凯发冷冻切片机。取出脑组织，用OCT胶包埋，一层层的包埋，注意:不能有气泡，否则营销切片；不能留有空隙否则会冻坏脑组织。冰冻切片的温度是-18℃～-25℃之间都可以的，脑组织最好是-18℃。

冰冻切片免疫荧光实验步骤

1、组织用4%多聚甲醛固定6-8小时，转至20%蔗糖溶液至组织沉底。

2、冰冻切片8-10μm，推荐k8凯发冷冻切片机，温度稳定，切片质量高。室温放置30分钟以上防脱片，-20℃保存。从冰箱拿出的冰冻切片在室温放置30分钟以上再进行免疫荧光。

3、1xPBS洗3次，每次3-5分钟。

4、用2%BSA室温或37℃封闭1小时。

5、一抗4℃孵育过夜。1xPBS洗3次，每次3-5分钟。

6、二抗室温或37℃，避光孵育1小时。1xPBS洗3次，每次3-5分钟。

7、DAPI染色。1xPBS洗3次，每次3-5分钟。

8、滴加防淬灭剂，封片。

k8凯发冷冻切片机最大的优势是智能恒温，全开窗切片超过3小时以上，箱体温度波动不超过2℃，使用者再也不需要半掩玻璃窗操作，即使样本再多，也能一次性顺畅的完成所有切片工作。此外，它独特的功能还有：专利可视指针标识，精准快速定位样本；智能废液管理系统，防止废液溢出污染地面；自动休眠和唤醒，节能同时消除等待时间；样品托标签设计，防止弄混。