单细胞样本制备老失败？

流式实验得到数据不可靠？

流式图不知道怎么分析？

「全线赋能“沃”的实验」之实验方法实战教程

直播第四期将带来

《流式细胞术》

从单细胞制备到流式细胞术，理论+实例

带你快速get到其中的难点要点

直播时间

5月31日（周二）19：00

报名方式

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主题：单细胞悬液样本的分类及制备

① 单细胞悬液样本类型

② 制备注意事项

③ 制备方法实例

讲师：冯启峥

k8凯发高级产品方案经理，专注动物传染病学和细胞与分子免疫学研究多年，在动物疫苗研发、CRISPR的原核细胞应用方面有着较为丰富的经验，致力于为客户提供专业的细胞与分子生物研究方案。

主题：流式细胞术的原理及应用

① 仪器基本结构解析

② 实验方法实操讲解

③ 技术应用介绍

讲师：方晟

昆明理工大学硕士研究生，已发表SCI论文4篇，在载体构建、药物活性筛选、肿瘤模型构建、单细胞数据分析等方面有着丰富的经验，研究方向主要是抗肿瘤药物的抗癌机理和单细胞测序分析。

上期直播间互动问题

这次我们全部为小伙伴解答

1、做外周神经损伤的小鼠能活多久？如何饲养？

外周神经损伤一般不会造成动物的死亡，但一些特殊情况会影响动物的存活率，比如为了避免在手术部位引起不良组织炎症，我们应该尽量缩短手术时间，如果手术部位意外出血，要用棉签适当按压。如果出血没有停止，就不要对这只动物进行进一步的实验。术后动物应该放进干净的鼠笼并分笼饲养，注意保温。

2、脊髓损伤造模后，动物出现功能障碍不能自主排尿该如何护理？

每日按压排尿3次，以防泌尿系统感染；连续3天，每天两次向腹腔注射相同剂量青霉素预防感染。

3、使用纤维蛋白胶修复的是外周神经损伤的哪个类型或者说等级呢?

纤维蛋白胶可以应用于横断的神经，帮助受伤神经的近端和远端残端紧密对齐，是神经缝合技术的一种替代方式。

4、坐骨神经挤压的结扎力度如何把控？

有一些文献上会使用带有力值的工具进行挤压神经，如果我们没有这类的工具，可以使用血管夹对神经进行夹持，保证力度的一致性。

5、有专门评估大小鼠前肢抓取能力的行为学实验吗?

针对于前肢的抓取能力，爪抓力测试仪可以测动物前肢，后肢的抓力，另外如果是判断动物前肢抓取食物的精细运动，可以用楼梯式抓取测试仪来进行。

6、目前好像2D步态分析居多，慢慢也看到了3D步态分析，两者相比各自有什么优缺点呢?

步态没有2D、3D的区别，国内使用较多的步态有2种：第一种是依靠压力感应可以生成动物脚掌受力的情况，判断动物的损伤情况；第二种是通过视频记录动物足部在运动时的轨迹，通过足部的运动过程计算生成动物活动过程中四肢运动的各项指标来判断动物的损伤情况。这两种方法从2个不同的方面完善了步态的分析数据，但实际上无法互相替代。一般来说大鼠步态用第一种压力感应测试的会多一些，小鼠步态则用视频记录的多一些。所谓的3D步态是通过从侧面拍摄动物运动时的腿部活动，对动物的步态运动进行更为细致的评估，与传统步态记录的是2个维度的信息，无法进行替代。由于需要识别动物腿部的关节，目前无法与足底步态很好的融合结果。

7、这种转棒实验是可以大小鼠通用的吗？如何检测到掉落？

转棒大小鼠主机通用，但是跑道是需要替换的。设备通过红外感应，电子感应等自动检测动物掉落情况，停止计时。

8、外周神经损伤会导致疼痛致敏，在模型检测中可以用什么疼痛检测方法呢？

主要看测痛的部位，机械痛一般可以用vonfery针或电子测痛仪来进行测试，针对不同部位也有面部疼痛测试仪（三叉神经），压感测痛仪（背部，较大的关节），钳式测痛仪（整个脚，细小的关节），热痛一般测试动物足底或尾部，使用红外测痛仪或者甩尾测痛仪。

9、怎么手动排尿？

按摩膀胱。

10、每天需要按摩多久？

术后需轻轻按摩挤压膀胱进行排尿，每次按摩到排空，每天至少三次。

11、不规则梯和错步分析仪是不是指一个东西啊？

是一种类型的仪器，不同厂家的名称，测试方法，输出的指标会略有不同。

12、转棒实验一直做不出差异怎么办？

可能有2种原因：

①测试时动物已经恢复到与正常鼠一致的水平，所以做不出差异。 

解决方法：将转棒测试时间提前。

②测试难度过于简单或者过于困难，导致差异很小，从而统计分析结果无差异。

解决方法：调整实验难度，直到可以做出差异的结果。新型转棒仪除了原先的匀速和匀加速以外还增加了阶段加速等测试方法，实验难度有了更大的调整空间。

13、两爪及四爪攀爬实验有合适的实验设备吗？

不规则梯结合自制实验设备。

14、脊髓损伤后有哪些评估手段？

脊髓损伤后可通过行为学对运动及感觉进行评估。BBB法：一般用于观察大鼠后肢行走及肢体活动，评分分为三个部分，0-7分评判动物后肢关节活动情况，8-13分评判后肢步态及协调功能，14-21分评判运动中爪的精细活动；BMS评分是在BBB评分基础上针对小鼠的运动特点做出了完善和修改，是专门用于小鼠后肢功能的评分方法。其他运动相关行为学：步态分析系统用于评估步态动力学、协调性分析、平衡性分析等；转棒仪可评估动物的运动协调性；行走障碍分析仪可分析简单步态及运动协调性等。感觉功能相关行为学：Vonfrey测痛针用于评估对触碰的敏感性；冷热盘用来测试动物对冷热刺激的敏感度。

15、平衡木也可以做小鼠吗 ？

有小鼠平衡木可以进行小鼠实验。

16、请问外周神经损伤后有哪些手段可以评价感觉功能的损失？

感觉功能相关行为学：机械痛一般可以用vonfery针或电子测痛仪来进行测试，评估对触碰的敏感性，针对不同部位也有面部疼痛测试仪（三叉神经），压感测痛仪（背部，较大的关节），钳式测痛仪（整个脚，细小的关节），热痛一般测试动物足底或尾部，使用红外测痛仪（用于量化对小鼠和大鼠后爪辐射或红外热刺激的热阈值的方法）或者甩尾测痛仪（一种基于对啮齿动物中热刺激回避反应的潜伏期测量的疼痛实验）。

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